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在大鼠ELISA實驗中，終止液（通常為2mol/L H?SO?）的作用是通過強酸性環(huán)境破壞辣根過氧化物酶（HRP）的活性，從而立即停止TMB底物的顯色反應。若漏加終止液，酶促反應將繼續(xù)，藍色會持續(xù)加深，吸光度（OD值）不斷上升，嚴重影響定量準確性。

常見錯誤與注意事項：

不能跳過終止步驟：有文獻指出部分ELISA可在不加終止液的情況下直接讀數(shù)，但這需嚴格控制時間且波長不同（終止前~650nm，終止后~450nm），常規(guī)檢測必須加終止液以穩(wěn)定顏色并轉(zhuǎn)換至標準波長。

洗板無法替代終止：洗滌只能去除游離成分，不能滅活已結(jié)合的HRP酶，反應仍會繼續(xù)。

安全操作：補加時避免產(chǎn)生氣泡，使用一次性吸頭防止交叉污染。

漏加終止液的影響與補救策略

建議

立即行動：一旦發(fā)現(xiàn)漏加，應第一時間補加終止液并讀數(shù)。

記錄異常：在實驗記錄中標明“漏加終止液，于XX分鐘后補加"，便于后續(xù)數(shù)據(jù)分析和復現(xiàn)實驗。

預防為主：使用標準化操作流程（SOP）或排槍配合多通道移液器，減少人為失誤。